Серологическая диагностика туляремии

Серологическая диагностика туляремии

Туляремия – природно-очаговая острая инфекция, поражающая лимфатические узлы, кожу, иногда слизистые оболочки глаз, зева и легкие. Туляремия протекает с выраженными симптомами общей интоксикации, продолжительной лихорадкой, генерализованным лимфаденитом, гепатоспленомегалией, полиморфной сыпью и другими симптомами.

В зависимости от способа заражения выделяют бубонную, язвенно-бубонную, глазобубонную, ангинозно-бубонную, легочную, абдоминальную и генерализованную формы туляремии. Очаги туляремии встречаются во многих странах северного полушария; в России они располагаются преимущественно на территории Европейской части и Западной Сибири. Наряду с чумой, холерой, сибирской язвой и другими инфекциями, туляремия причислена к особо опасным инфекциям.

Специфическая диагностика туляремии проводится с помощью серологических реакций (ИФА, РА, РНГА), ПЦР, кожно-аллергической пробы. В лечении туляремии применяется антибактериальная, дезинтоксикационная терапия, хирургическое вскрытие и дренирование нагноившихся бубонов.

Характеристика возбудителя

Возбудителем туляремии является аэробная грамотрицательная палочковая бактерия Francisella tularensis. Туляремийная палочка – довольно живучий микроорганизм. Он сохраняет жизнеспособность в воде при температуре 4 °С до месяца, на соломе или в зерне при нулевой температуре до полугода, температура 20-30 °С позволяет бактериям выжить 20 дней, а в шкурах умерших от туляремии животных микроорганизм сохраняется около месяца при 8-12 градусах. Погибают бактерии при воздействии высоких температур и дезинфицирующих средств.

Резервуаром инфекции и его источником служат дикие грызуны, птицы, некоторые млекопитающие (зайцевидные, собаки, овцы и др.) Наибольший вклад в распространение инфекции вносят грызуны (полевка, ондатра и др.). Больной человек не заразен.

Наиболее распространен трансмиссивный механизм передачи. Микроб попадает в организм животных при укусе клеща или кровососущих насекомых. Для туляремии характерно заражение животных при укусе иксодовым клещом. Человек заражается при контактировании с больными животными (снятие шкуры, сбор грызунов) или при употреблении в пищу продуктов и воды, инфицированных животными.

Респираторный путь передачи инфекции реализуется при вдыхании пыли от зараженных бактериями зерна или соломы, на сельскохозяйственных производствах (переработка растительного сырья, мясокомбинаты, забой крупного рогатого скота и др.). Несмотря на малую вероятность заражения туляремией вне природного очага распространения возбудителя, возможно заболеть при контакте с завезенными из эпидемиологически неблагополучных районов продуктами и сырьем. Восприимчивость человека к туляремии крайне высока, заболевание развивается практически у 100% инфицированных

.

Классификация туляремии

Клиническая классификация туляремии производится в зависимости от локализации инфекции (бубонная, язвенно-бубонная, глазобубонная, ангиозо-бубонная, абдоминальная и генерализованная туляремия), продолжительности (острая, затяжная и рецидивирующая) и степени тяжести (легкая, среднетяжелая и тяжелая).

Симптомы туляремии

Симптомы туляремии очень разнообразны и представлены как общими симптомами интоксикации, так и специфическими признаками. Общие симптомы характеризуют начало заболевания вне зависимости от его формы.

Существуют следующие общие симптомы туляремии:

  • высокая температура;
  • озноб;
  • резкая головная боль;
  • боль в мышцах;
  • инъекция сосудов склеры;
  • сыпь.

Начало заболевания характеризуется резким подъемом температуры до 39 градусов Цельсия. Температура сопровождается ознобом и длится от двух до трех недель. Возникает резкая головная боль, тошнота, а иногда и рвота. Конъюнктива глаз становится резко красной, а на теле появляется сыпь. Все эти симптомы связаны с явлением общей интоксикации и обусловлены действием эндотоксина. Эндотоксин, высвобождаясь из умерших бактерий, обладает пирогенным (поднимает температуру) и кожно-некротическим действием. Также в этот период добавляется аллергический компонент иммунной реакции, в связи с чем на теле появляется полиморфная сыпь. Основным специфическим симптомом этого периода является регионарный лимфаденит (увеличение регионарных лимфатических узлов).
Все эти симптомы характерны для большинства микробных инфекций, в том числе и для зоонозов.

Дальнейшая клиническая симптоматика заболевания во многом определяется входными воротами и локализацией патологического процесса. Условно выделяют локальные формы туляремии с поражением кожи, слизистых и лимфатических узлов и формы с преимущественным поражением внутренних органов.

Инкубационный период туляремии может составлять от одного дня до месяца, но чаще всего равен 3-7 дням.

Осложнения туляремии

Осложнения при туляремии характерны для ее генерализованной формы, одним из самых распространенных осложнений является вторичная пневмония. При генерализации инфекции возможно развитие инфекционно-токсического шока. Иногда туляремия может осложняться менингитом и менингоэнцефалитом, воспалением сердечной сумки, артритами.

Диагностика туляремии

Неспецифические лабораторные методики (общий анализ крови, мочи) показывают признаки воспаления и интоксикации. В первые дни заболевания в крови нейтрофильный лейкоцитоз, в дальнейшем общее количество лейкоцитов падает, увеличивается концентрация фракций лимфоцитов и моноцитов.

Специфическая серологическая диагностика производится с помощью РА и РНГА (реакции прямой агглютинации и непрямой гемагглютинации). При прогрессировании заболевания происходит нарастание титра специфических антител. С 6-10 дня после начала заболевания возможно определение туляремии с помощью иммуно-флюоресцентного анализа (ИФА) — наиболее чувствительный в отношении туляремии серологический тест. Для ранней диагностики (в первые дни лихорадки) можно применять ПЦР. Быстрая и достаточно специфическая диагностика может осуществляться с помощью кожно-аллергической пробы с туляремическим токсином (дает результат уже на 3-5 день болезни).

Поскольку выделение бактерий из крови и других биологических материалов представляет определенную трудность, бактериологический посев осуществляют редко. На 7-10 день заболевания можно выделить возбудителя путем бакпосева отделяемого язв, пунктата бубонов, но необходимые для посева данной культуры лабораторные средства распространены мало. При легочной форме туляремии проводят рентгенографию или КТ легких.

Читайте также:  Микрососудистая стенокардия

Лечение туляремии

Профилактика туляремии

Профилактика туляремии включает меры по обеззараживанию источников распространения, пресечения путей передачи. Особое значение в профилактических мероприятиях имеет санитарно-гигиеническое состояние предприятии питания и сельского хозяйства в эндемичных по данному возбудителю районах, дератизация и дезинсекция.

Индивидуальные меры защиты от заражения необходимы при охоте на диких животных (снятии шкуры, разделывании), дератизации (при сборе потравленных грызунов). Руки желательно защищать перчатками, либо тщательно дезинфицировать после контакта с животными. В качестве пресечения алиментарного пути передачи желательно избегать употребления воды из ненадежного источника без специальной обработки.

Специфическая профилактика туляремии представляет собой вакцинацию населения в эндемичных районах живой туляремической вакциной. Иммунитет формируется на 5 и более (до семи) лет. Ревакцинация через 5 лет. Экстренная профилактика (при высокой вероятности заражения) осуществляется с помощью внутривенного введения антибиотиков. При выявлении больного туляремии дезинфекции подлежат только те вещи, которые применялись при контакте с животным или зараженным сырьем.

Лабораторная диагностика туляремии

Спорадическая заболеваемость туляремией, полиморфизм клинических проявлений вызывают определенные трудности постановки диагноза. Всегда необходимо помнить, что трудность распознавания туляремии по клиническим признакам обусловливает необходимость комплексной диагностики с учетом данных эпидемиологического анализа (анамнеза), клинических признаков и лабораторного исследования.

Для целей лабораторной диагностики туляремии у людей используют серологические реакции (реакция агглютинации, РПГА, РНГА, реакция иммунофлюоресценции) и кожно – аллергическую пробу.

Наиболее широко распространена реакция агглютинации. Она считается положительной при получении агглютината со специфическим антигеном в разведении сыворотки 1:100 и выше. Агглютинины выявляются со 2-й недели болезни. Нарастание титров в динамике подтверждает диагноз. Более чувствительна реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) или реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). В качестве антигена применяют (для серологических реакций) туляремийный диагностикум (убитая формалином взвесь туляремийных бактерий). К ускоренным методам ориентировочной серологической диагностики туляремии относится кровяно – капельная реакция агглютинации. На предметное стекло наносят толстую каплю крови больного, каплю дистиллированной воды для лизиса эритроцитов (облегчает чтение реакции) и каплю диагностикума. Агглютинация наступает немедленно при наличии в крови больного агглютининов (антител) в диагностическом титре 1:100 и выше. Однако она не отражает динамики нарастания титра антител и не является ранним методом диагностики.

Внутрикожная аллергическая проба на введение аллергена – тулярина – относится к высокочувствительным и высокоспецифичным и ранним тестам: положительный ответ ее можно получить уже на 3 – 5 день болезни. Тулярин вводят внутрикожно по 0,1 мл. в среднюю треть плеча с ладонной стороны. Учет реакции производят через 24-48 часов, считая ее положительной при наличии инфильтрата, болезненности и гиперемии диаметром от 0,5 см. и более. Только одна гиперемия, исчезающая через сутки, расценивается как отрицательный результат.

Бактериологический метод (посев исследуемого материала на селективные питательные среды (желточную среду Мак-кое) не всегда эффективен.

Самый надежный способ обнаружения туляремийного микроба в любом исследуемом материале – биологический метод исследования: постановка биопроб (заражение исследуемым материалом биопробных животных – белых мышей, которые погибают от туляремии обычно на 3-4 реже на 6-10 сутки). В последнее время при обследовании очагов широко и успешно используют серологическую реакцию РНГА. Этим методом исследуют погадки хищных птиц, помет грызунов и другие объекты внешней среды для поиска туляремийного антигена в них для принятия адекватных мер по профилактике заболеваний людей туляремией.

ПРОФИЛАКТИКА

Предупреждение туляремии складывается из двух главных направлений: контроля за природными очагами и вакцинопрофилактики людей. Контроль в природных очагах проводят путем систематического наблюдения за численностью грызунов и их инфицированностью, выявление инфицированных переносчиков; эпидемиологической разведки новых территорий, исследования воды открытых и временных водоемов, зерна и других объектов внешней среды, составление прогнозов эпизоотологической и эпидемиологической ситуаций. Подавление природных очагов включает уничтожение грызунов и переносчиков, запашку, осушение территории действующего очага или создание водоемов. Практика показала, что ликвидация природного очага достигается трудно, и в большинстве случаев они существуют длительно.

Важной и эффективной мерой профилактики является вакцинация людей. В соответствии с действующими правилами (приказ МЗ СССР № 133 от ) прививкам подлежат люди, проживающие на территории, энзоотичной по туляремии, а также выезжающие на сезонные работы или отдых в такие места. Для прививки используют вакцину из живых туляремийных микробов. Ее прививают накожно, однократно. На 5-7 и 12-15 день проверяют прививаемость. В случае отрицательного результата проводят повторную прививку. вакцинация обеспечивает иммунитет, который сохраняется до 5 лет, а вотдельных случаях до 10-15 лет.

Состояние иммунитета среди населения контролируют через 1-2 года путем выборочного обследования взрослого населения. Для этой цели используют накожную аллергическую пробу с тулярином, а в некоторых случаях – серологические реакции (РА и РНГА). иммунная прослойка должна составлять около 90%.

Читайте также:  Общий анализ крови сдвиг влево

В настоящее время плановую вакцинопрофилактику проводят не на всей территории природного очага, а в пределах энзоотичного района и прилегающих к нему сходных ландшафтов.

Большое внимание следует уделять санитарно – просветительной работе среди профессиональных групп, контактирующих с грызунами. В очаге запрещается пользоваться сырой водой из открытых водоемов, проводят меры защиты продуктов и водоисточников от мышевидных грызунов. Охотникам рекомендуют при снятии шкурок с убитых грызунов пользоваться перчатками. В случаях эпизоотии среди грызунов сельскохозяйственным рабочим рекомендуют ношение очков – консервов и масок при скирдовании сена, соломы, обмолоте хлеба и т.д

а) Наиболее распространенным и вместе с тем вполне точным методом серологической диагностики туляремии является реакция агглютинации (РА). Она служит для установления диагноза у больного или переболевшего (ретроспективный диагноз) и может быть использована при изучении иммунологического состояния привитых против туляремии. Обнаружение агглютининов у больного туляремией обычно отмечается через 10-15 дней, при этом агглютинационный титр сыворотки в этот период составляет 1:50-1:100, но далее быстро нарастает и на 4-6-й неделе болезни достигает 1:400-1:800, реже 1:1600 и выше.

По достижении максимальных показателей агглютинационный титр сыворотки затем медленно снижается и через 6-12 месяцев составляет 1:100-1:400, а позднее падает до 1:10-1:50 и на этом уровне может удерживаться в течение многих лет. Длительность сохранения агглютининов делает возможным использование РА для ретроспективного диагноза.

У привитых против туляремии агглютинины обнаруживаются через 2-3 нед., достигают через 4-6 нед. максимальных титров 1:160-1:320, реже выше, затем снижаются до 1:10-1:40 и обычно выявляются в течение 5-7 лет после вакцинации.

Антигеном для РА служит туляремийный диагностикум, представляющий собой убитую формалином взвесь туляремийных бактерий вакцинного штамма. В 1 мл препарата содержится 25 млрд, туляремийных бактерий. Для постановки РА туляремийный диагностикум предварительно разводят 0,9%-ным раствором хлорида натрия (pH 7,0-7,2) в 5 раз до концентрации 5 млрд, туляремийных бактерий в 1 мл.

Учет результатов РА производят через 18-24 ч невооруженным глазом. Оценку реакции осуществляют на основании степени прозрачности надосадочной жидкости в пробирках, количества и характера осадка микробной массы (агглютината).

Агглютинационный титр сыворотки учитывают по последнему разведению, которое дало вполне четкую реакцию (не менее трех плюсов).

При серологической диагностике туляремии у человека диагностическим считается титр 1:100 и выше, однако обязательно должно быть прослежено его нарастание. При отрицательной или сомнительной реакции, а также при положительной реакции в низких разведениях сыворотки у подозрительных на туляремию больных рекомендуют повторить исследование сыворотки через 7-10 дней. Нарастание титра сыворотки в 2-4 раза и выше свидетельствует о свежем случае туляремии и подтверждает диагноз.

Реакцию агглютинации можно ставить в микрообъемах, используя для этого сыворотку или плазму крови, взятую из пальца руки. Диагностикум для реакции микроагглютинации готовят из убитой культуры вакцинного штамма туляремийного микроба, которую окрашивают гематоксилином. Реакцию микроагглютинации ставят в полистироловых пластинах микротитратора Такачи. Для этого в ряд лунок полистироловой пластины микротитратора Такачи вносят 50 мкл физиологического раствора (pH 7,0-7,2).

Затем при помощи титратора с головкой объемом 50 мкл раститровывают исследуемую сыворотку, предварительно разведенную 1:5 (или неразведенную плазму крови) и добавляют в каждую лунку равный объем (50 мкл) цветного, окрашенного гематоксилином диагностикума. При этом происходит разведение сыворотки в 4 раза (с 1:5 до 1:20), и получают следующий ряд разведений сыворотки 1:20, 1:40, 1:80, 1:160 и т.д. Пластины тщательно встряхивают и помещают на 2 ч в термостат при температуре 37°С, затем выдерживают 12-18 ч при комнатной температуре. В лунках с положительным результатом антиген выпадает на дно в виде «зонтика» (агглютинат), а в случае отрицательного результата — в виде «пуговки».

Титры реакции микроаттлютинации, как правило, совпадают или на одно разведение ниже титров РА, выполненной макрометодом.

б) Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) является чувствительным методом серологической диагностики и используется как для ранней, так и ретроспективной диагностики, а также для определения иммунологического состояния привитых. У больных туляремией гемагглютинины обычно обнаруживаются в конце первой или на второй неделе заболевания. Через 1—1,5 мес. титры РНГА достигают максимальных показателей (1:10 000-1:20 000, реже выше), после чего снижаются и на уровне 1:100-1:200 сохраняются длительное время.

У привитых антитела также обнаруживаются постоянно, однако, в более низких титрах, не превышающих 1:2000-1:5000 через 1-1,5 мес. после вакцинации, и сохраняются в течение нескольких лет на низком уровне 1:20-1:80. Обычно гемагглютинационный титр сыворотки превышает таковой агглютинационный. Особенно это выражено у больных в острый период болезни или у привитых в короткие сроки после вакцинации. При ретроспективном обследовании переболевших и привитых в отдаленные сроки резких различий в титрах РА и РИГА не отмечается.

Читайте также:  Экстракт алоэ в ампулах для волос

Антигеном для постановки РИГА служит туляремийный эритроцитарный диагностикум (антигенный). Препарат представляет собой формал и визированные эритроциты барана, сенсибилизированные туляремийным антигеном; выпускается в жидком и сухом виде. Жидкий препарат — 10% взвесь эритроцитов в 10%-ном растворе формалина. Сухой лиофилизированный препарат — высушенная в вакууме 10% взвесь эритроцитов без консерванта. Перед употреблением его разводят в соответствии с указаниями на этикетке. Для постановки реакции в полистироловых пластинах оба препарата применяют в 2,5%-ной концентрации, а при постановке реакции в микрообъемах — в 0,5%-ной концентрации. Гемагглютинационный титр сыворотки учитывают по последнему ее разведению, которое дало вполне четкую реакцию (не менее трех плюсов).

Диагностическим титром считается разведение 1:100 и выше, однако, так же как и в случае РА, необходимо проследить за его нарастанием.

РНГА при туляремии является достаточно специфичной и обнаруживает некоторые перекрестные реакции только с бруцеллезными сыворотками. Дифференциальная диагностика возможна по высоте титров в РНГА, которые значительно выше с гомологичным антигеном.

РНГА может быть выполнена в микрообъемах при помощи микротитратора типа Такачи, который позволяет осуществлять титрование материала в объемах 25 и 50 мкл. Техника постановки реакций, последовательность всех операций такая же, как и при исследовании в полистироловых пластинах. Следует, однако, иметь ввиду, что чувствительность микрометода обычно на одно разведение (т.е. в 2 раза) ниже, чем макрометода.

Специфичность положительного результата, полученного в РНГА, может быть проверена при помощи трехкомпонентной реакции — реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТНГА). Эту реакцию ставят для подтверждения специфичности положительного результата РНГА, когда он вызывает сомнение или представляет особый эпидемиологический интерес. Механизм реакции заключается в специфическом торможении гемагглютинации при добавлении к испытуемой сыворотке взвеси убитых туляремийных бактерий. В реакции взаимодействуют три компонента: испытуемая сыворотка, специфический туляремийный антиген и антигенный эритроцитарный диагностикум.

в) Иммуноферментный анализ на твердом носителе используют для диагностики туляремии у больных и переболевших людей, определения наличия иммунитета у вакцинированных против туляремии. У больных туляремией специфические антитела обнаруживаются в И ФА в промежутке между 6-10-м днями, достигают максимальных показателей к 4-7-й неделе, затем уровень их снижается, но они продолжают выявляться длительное время (более 10 лет после переболевания). ИФА обеспечивает более раннюю (по сравнению с РА и РИГА) и эффективную иммунологическую диагностику. Титры антител у больных и вакцинированных колеблются в значительных пределах от 1:400 до 1:40 000 и выше и, как правило, в 10-20 раз превышают таковые в РА и РНГА.

Для постановки ИФА используют диагностическую тест-систему иммуноферментную для определения туляремийных антител. Выявление туляремийных антител в сыворотках людей происходит за счет специфического взаимодействия антигена возбудителя туляремии, адсорбированного на планшете, с туляремийными антителами в исследуемой сыворотке. Образовавшийся комплекс антиген — антитело определяют при помощи антител против иммуноглобулинов человека, меченных иероксидазой.

В соответствии с назначением тест-система представляет собой набор ингредиентов для проведения иммуноферментного анализа на твердофазном носителе и включает в себя: туляремийный липонолисахарид; антитела против иммуноглобулинов человека, меченных иероксидазой; контрольную положительную сыворотку; контрольную отрицательную сыворотку; набор солей, необходимых для приготовления буферных растворов; субстрат — О-фенилендиамин (ОФД); твин-20; бычий сывороточный альбумин (БСА); планшеты для ИФА однократного применения.

Сыворотки рекомендуется первоначально исследовать параллельно в двух лунках в разведении 1:200 с последующей раститровкой положительных, сывороток, для определения титра антител, используя двукратные разведения. Диагностическим титром в ИФА считают разведение сыворотки 1:400 и выше.

В последние годы для диагностики туляремии разработаны и некоторые другие методы, в частности основанные на использовании синтетических носителей для сенсибилизации антигена, с успехом используемые в отдельных регионах и учреждениях.

г) Непрямой иммунофлуоресцентный метод. Для обнаружения туляремийных антител готовят мазки из 1-2-суточной агаровой культуры возбудителя (взвесь 1 млрд клеток/мл). При этом на одном предметном стекле делают 8 мазков, фиксируют их в этиловом спирте в течение 30 мин, не обжигая высушивают на воздухе и помещают во влажную камеру. Исследуемую сыворотку разводят двукратно до разведений от 1:10 до 1:640-1:1280 и наносят пастеровской пипеткой на мазки, начиная с большего разведения. Влажную камеру с препаратом помещают в термостат при 37°С на 30 мин. Мазок отмывают от несвязавшихся антител и после подсыхания его вновь помещают во влажную камеру, докрашивая антивидовой люминесцирующей сывороткой в рабочем разведении. После просмотра препарата устанавливают титр антител в исследуемой сыворотке.

Контролем служат препараты, в которых туляремийные бактерии обработаны туляремийной сывороткой (положительный контроль) и сывороткой, не содержащей антитела к возбудителю туляремии (отрицательный контроль). При исследовании сыворотки больного с подозрением на туляремию диагностическим считается титр не менее 1:40.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 30.1.2020

Ссылка на основную публикацию
Середина голени это где
1. Малая медицинская энциклопедия. — М.: Медицинская энциклопедия. 1991—96 гг. 2. Первая медицинская помощь. — М.: Большая Российская Энциклопедия. 1994...
Семя льна при панкреатите как принимать
Льняные семечки издавна использовались в качестве средства, улучшающего функции всего пищеварительного тракта. Раньше люди не понимали, что принимая внутрь льняное...
Семявыводящий проток воспаление симптомы
Эпидидимитом называют воспаление придатка яичка, орхитом - воспаление самого яичка, а орхиэпидидимитом - одновременное воспаление и яичка, и его придатка....
Серная мазь от бородавок
Одной из самых распространенных проблем с кожей является появление бородавок. Однако наросты не только доставляют эстетические неудобства, но и нередко...
Adblock detector